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SspDI属于常规限制酶系列，可识别G^GCGCC序列。不同于SwiftCut系列快速内切酶，SspDI需要较长时间酶切以实现DNA底物的完全切割，但该酶仍使用SwiftCut限制酶通用反应缓冲液SwiftOne Buffer，实现双酶切。

• 超长时间孵育/星号活性检测：37℃下，将10U SspDI与1μg pBR322共同温育16h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。
  
• 酶切-连接-再酶切检测：37℃下，使用10倍酶量消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

• 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性。
  
• 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂(例如甘油、盐)与底物溶液中的污染物(例如盐、EDTA或乙醇等)相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。
• 甲基化影响：Dam甲基化不影响；Dcm甲基化不影响；CpG剪切受阻；EcoKI甲基化不影响；EcoBI甲基化不影响。
  
• 同裂酶：KasI、DinI、EgeI、EheI、Mly113I、NarI、PluTI、SfoI。
  
  同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同的敏感性。
  
  
• 热失活：在80℃加热20min失去活性。

• 按下表在冰上依次加样配制反应体系。
  

  成分	用量
  10×SwiftOne Buffer	5μL
  底物DNA	1μg
  SspDI内切酶(10U/μL)	1μL
  ddH2O	至50μL

  DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响SspDI酶活性。
  
  
• 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋)，然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
  
• 37℃温育1～16h。
  
• 80℃孵育20min即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。